Caractérisation des cibles du domaine immunosuppresseur des envelopes rétrovirales: récepteur et voies de signalisation/ nouvelles approches thérapeutiques – IS-Therapeutics

L’UMR8122 dirigée par le Coordinateur a identifié sur les protéines d’enveloppe des rétrovirus un domaine ayant des propriétés «immunosuppressives» (domaine IS) in vivo. Le domaine IS a été cartographié, et des mutations lui faisant perdre sa fonction immunosuppressive dans des conditions qui préservent la fonctionnalité «mécanique» de la protéine d’enveloppe ont été identifiées. Celles-ci ont permis de démontrer que ce domaine est absolument requis pour une virémie persistante in vivo, via l’introduction de ces mutations dans un rétrovirus leucémogène modèle de souris (le virus de Friend): alors que les virus sauvage et mutant sont identiquement capables de rendre les souris virémiques lorsque celles-ci sont immuno-déficientes (souris irradiées ou athymiques), seul le virus sauvage, dont le domaine IS est intact, induit une virémie chez la souris immunocompétente. Par ailleurs, nous avons montré que les protéines d’enveloppe mutées pour la fonction IS sont d’excellents immunogènes, avec des niveaux d’immunogénicité 10-100 fois supérieurs à ceux obtenus avec la protéine sauvage, conduisant à la mise en œuvre d’ approches vaccinales performantes, avec en particulier la mise au point d’un vaccin vétérinaire «optimisé», dirigé contre le rétrovirus leucémogène félin FeLV (mis sur le marché mi-2012, licence concédée par le partenaire Viroxis à Mérial), et la réalisation de vaccins prophylactiques prototypes contre les rétrovirus de l’immunodéficience féline et humaine (FIV, HIV) qui ont fait l’objet d’un précédent financement ANR-RPIB (LENTIxIS, fin en Septembre 2014) et qui sont maintenant en essai pré-clinique avec la perspective d’un dévelopement chez l’homme pour ce dernier. L’objectif du présent programme est de développer non plus une approche de type préventif (vaccins prophylactiques), mais une approche de type thérapeutique (molécules « médicaments ») contre les rétrovirus, sur les mêmes bases conceptuelles. Les recherches de nature fondamentale menées par l’UMR8122 ayant en effet démontré qu’un rétrovirus dont le domaine IS a été rendu inactif peut in fine être éliminé par le système immunitaire de l’hôte, nous allons développer des molécules capables de neutraliser les effets du domaine IS, via le criblage de chimiothèques réalisé in vitro et permettant d’identifier des molécules « hit » capables de bloquer la liaison domaine IS-recepteur et/ou les voies de transduction associées. Le programme de travail proposé met à contribution les compétences de l’UMR 8122 dans les domaines de la biologie moléculaire et cellulaire du domaine IS, et les capacités de Viroxis de mener à terme des criblages de chimiothèque à haut débit, ainsi que des essais menés in vivo sur des modèles animaux souris et singe. Une interaction productive a déjà été mise en œuvre précédemment entre ces deux structures, qui a conduit au dépôt de brevets communs et à des développements ayant abouti à la mise sur le marché d’un vaccin (cf ci-dessus). Une première étape va consister à identifier les interactants du domaine IS, et ce par différentes approches, d’une part «protéomique» avec le marquage covalent des molécule cibles du domaine IS, lui même «marqué» par des acides aminés photoactivables, et leur identification par spectroscopie de masse après purification, et d’autre part des approches «génétiques» mettant en oeuvre des banques d’expression et leur criblage. Parmi ces dernières, un crible double-hybride mené par la société Hybrigenics a déjà fourni des gènes candidats, qui sont actuellement testés in vitro pour la liaison directe de domaine IS marqués (co-IP, ELISA) et peuvent déjà constituer les bases d’un crible de chimiothèque. Des banques d’expression lentivirales suivies de sélections itératives par tri cellulaire et remise en culture seront également mises en œuvre. Le criblage de chimiothèque sera effectué en collaboration avec les équipes du Labex LERMIT, dont l’UMR 8122 est une des équipes fondatrices.