INHIBITION DE LA VOIE DAXX-DEPENDANTE DANS LES LESIONS DE L'ISCHEMIE/REPERFUSION MYOCARDIQUE PAR DES PEPTIDES INHIBITEURS. – MyocarDaxx

Au cours de l'infarctus du myocarde, le traitement recommandé pour diminuer la taille de l'infarctus est la reperfusion précoce de l'artère (angioplastie ou thrombolyse). Outre ses effets bénéfiques, elle s'accompagne de lésions de reperfusion conduisant à la mort des cellules cardiaques. Les voies de signalisation apoptotiques activées au cours de l'ischémie/reperfusion (I/R) myocadique sont mal connues. Récemment, nous avons montré que la protéine adaptatrice Daxx, qui lie le domaine de mort du récepteur Fas, joue un rôle clé in vivo dans la cascade apoptotique au cours de l'I/R. La taille de l'infarctus et l'apoptose sont diminuées chez les souris mutantes surexprimant un dominant négatif de Daxx. La voie Fas-Daxx apparaît donc comme une cible potentielle dans la cardioprotection. Le but de notre projet est de caractériser les mécanismes cellulaires à l'origine des lésions de reperfusion, en particulier ceux de la voie Daxx, et d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques L'objectif 1 de notre projet concerne l'étude les voies de signalisation impliquées dans les lesions induites par l'I/R et vise à définir le rôle de la voie Fas-Daxx afin d'identifier des cibles moléculaires permettant d'inhiber la mort cellulaire et de diminuer la taille de l'infarctus in vivo. Des souris Daxx-DN hétérozygotes et des souris wild type seront soumises au protocole chirurgical d'I/R myocardique. En complément d'une approche protéomique, une analyse transcriptionnelle différentielle (puces à ADN pangénomiques) permettra d'identifier les gènes régulés positivement ou négativement chez les souris Daxx-DN comparées au souris WT en condition contrôle (influence du transgène) et au cours de l'I/R. Le rôle de la voie FADD-caspase8 (FADD transduit le signal de Fas) sera évalué en utilisant une approche protéomique (western blot et activité caspase). Nous évaluerons également si Daxx, bien que proximale dans la cascade Fas-Daxx, régule la fermeture du pore de transition mitochondrial (mPTP). Pour cela, la respiration mitochondriale et l'ouverture calcium-dépendante du mPTP. L'implication de la voie mitochondriale dans les lésions de reperfusion sera évaluée chez les souris Daxx-DN ayant reçu un bolus de ciclosporine A (bloqueur spécifique du mPTP) à la reperfusion.
L'objectif 2 de notre projet permettra de développer une stratégie nouvelle utilisant des peptides synthétiques qui vont bloquer l'interaction spécifique de Daxx avec Fas et mimeront les effets bénéfiques obtenus avec la protéine transgénique Daxx-DN. Nous utiliserons pour cela des technologies de pointe afin de sélectionner, optimiser et synthétiser des peptides inhibiteurs de la voie Daxx (peptides SPOT arrays) et de permettre l'internalisation de ces DSIP (pour Daxx Signalling Inhibitory Peptides) dans les tissus cardiaques au cours de l'I/R myocardique chez la souris. La cardioprotection par le traitement DSIP sera mesurée et comparée à celle obtenue chez les souris mutantes Daxx-DN.
Ce projet devrait nous permettre (objectif 1) d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques interagissant avec la cascade Fas-Daxx. L'objectif 2, qui sera conduit en même temps, a pour but de définir des peptides qui miment les effets de la protéine transgénique Daxx-DN.
En conclusion, ce projet devrait permettre d'améliorer notre compréhension et nos connaissances des mécanismes de mort cellulaire au cours de l'ischémie/reperfusion myocardique. De plus, la réalisation de ce projet permettra la synthèse et la caractérisation de peptides inhibiteurs de la voie Daxx (ou DSIP) utilisables en pratique clinique pour lutter contre les lésions de reperfusion. Il devrait nous fournir à terme de nouvelles molécules pour le traitement des lésions de l'ischémie/reperfusion.