Développement de tests rapides, sensibles et quantitatifs utilisant des immunoliposomes fluorescents – RATIO

Dans de nombreux domaines, il existe un besoin de méthodes rapides, sensibles et spécifiques pour détecter ou quantifier des contaminants ou des molécules d'intérêt. Beaucoup de méthodes sensibles sont maintenant disponibles cependant elles nécessitent du temps pour leur mise en oeuvre ou le savoir-faire d'un spécialiste. Les tests immunochromatographiques également appelés tests bandelette ou lateral flow immunoassay (LFIA), combinent l'efficacité et la sensibilité des dosages immunologiques avec la simplicité et la rapidité. De plus cette méthode peu coûteuse n'exige pas de qualifications spéciales et est particulièrement bien adaptée pour les applications de terrain ou de routine. Au cours de ces dernères années, l'intérêt pour cette technologie a été grandissant dans differents secteurs: diagnostic médical, sécurité alimentaire, militaire/biodéfense, santé animale, suivi thérapeutique et surveillance de l'environnement.
Le marché mondial pour les tests effectués chez le praticien ou au chevet du patient ( Point Of Care ) est estimé à 11 milliards de dollars pour 2007 avec un taux de croissance de 11% par an. Pour cette application le marché des Etats-Unis est estimé à 625 millions de dollars en 2006. Cependant, à l'heure actuelle cette méthode est moins sensible que d'autres techniques telles que les dosages immunologiques conventionnels ou la spectrométrie de masse et de plus elle ne permet pas une quantification précise. Afin d'augmenter cette sensibilité, nous avons développé et breveté une nouvelle procédure utilisant des liposomes, dans lesquels sont encapsulés des fluorophores, comme marqueur fluorescent pour les LFIA. Ces marqueurs fluorescents ont un faible coût de production car cette production utilise des produits de base bon marché avec un protocole bien établi. Ce nouveau procédé permet une augmentation de la sensibilité des bandelettes d'un facteur de 10 à 30.
De plus le signal fluorescent obtenu avec ces immunoliposomes peut être aisément mesuré avec un lecteur portatif autorisant ainsi la quantification de l'analyte. Le développement de bandelettes ayant une meilleure sensibilité permettra d'étendre leur utilisation en particulier à la détection de molécules telles que les toxines ou pesticides qui nécessite une grande sensibilité. Le but de ce projet est de démontrer que notre méthode peut-être utilisée pour des applications sur le terrain et au chevet du patient. Pour cela, nous devons i) montrer et valider à travers des exemples pertinents que notre méthode permet une détection sensible et quantitative, ii) adapter les différentes parties du dispositif du test immunochromatographique et les processus de fabrication à notre nouveau procédé, avec l'objectif de réaliser un transfert technologique à une entreprise bien établie dans le domaine des test rapides.
Au cours de ce projet différents objectifs devront être atteints: 1) Démontrer qu'un lecteur de fluorescence portatif de bandelette commercial peut être utilisé pour quantifier la fluorescence des immunoliposomes; 2) Déterminer les conditions de production afin d'obtenir des bandelettes stables, compatibles avec l'utlisation des immunoliposmes. En effet certains réactifs utilisés lors de la fabrication des bandelettes, tels que les détergents, peuvent avoir des effets délétères sur les liposomes au cours de la migration. 3) Concevoir une cassette qui permette une étape préincubation entre l'échantillon et l'anticorps traceur avant la migration et qui après la migration stoppe le flux de liquide. 4) Déveloper un test de détection pour les IgEs dirigées contre les allergènes de l'arachide. Pour ce test nous devrons choisir un allergène universel permettant la détection de l'ensemble des personnes allergiques à l'arachide.
5) Quantifier un analyte en utilisant les bandelettes développ