Hyperactivation de la NADPH oxydase phagocytaire dans la Polyarthrite Rhumatoïde – ARTHRITis-ROS

Les formes réactives de l’oxygène (FRO) produites par la NADPH oxydase des polynucléaires neutrophiles (PN) participent à l'induction de lésions tissulaires sévères telles que celles existant dans la polyarthrite rhumatoïde (PR). Nous avons identifié sur la p47phox, composant nécessaire à l'activation de la NADPH oxydase, l'existence d’un site phosphorylé, la Ser345. Cette phosphorylation est détectée in vitro après prétraitement des PN par le TNFa ou le GM-CSF et ex vivo dans les PN de patients atteints de PR. La phosphoSer345 dépend probablement du taux élevé de cytokines proinflammatoires dans le liquide synovial de patients atteints de PR et pourrait être un site clé de l'hyperactivation de la NADPH oxydase dans la PR. Nos objectifs sont d'étudier les mécanismes moléculaires induits par les cytokines proinflammatoires qui régulent cette phosphorylation et l'hyperactivation de la NADPH oxydase afin de développer de nouvelles stratégies thérapeutiques antiinflammatoires dans la PR. //Ce projet s'appuie sur des résultats préliminaires montrant une inhibition de l'hyperactivation de la NADPH oxydase par un inhibiteur de Pin1, une proline isomérase, qui se lie aux séquences phosphorylées par les MAPKs telles la phosphoSer345 de la p47phox. Nous avons montré une interaction directe entre la phosphoSer345 de la p47phox et Pin1. Le projet confirmera cette interaction et l'action de Pin1 dans l'hyperactivation de la NADPH oxydase par les cytokines en utilisant des dominants négatifs de Pin1. Les conséquences de l'interaction phosphoSer345p47phox/Pin1 sur le changement de conformation de la p47phox et sur l'activation de la NADPH oxydase seront recherchées. L'effet de Pin1 sera étudié en système acellulaire reconstituant la NADPH oxydase. Un axe complémentaire s'appuie sur l'existence d'un couplage des MAPKs à la phospholipase D (PLD) en amont de la NADPH oxydase. Nous montrerons que ce couplage pourrait participer à la phosphorylation de la Ser345 et à l'hyperactivation de la NADPH oxydase après traitement par TNFa et GM-CSF. Parallèlement, nous étudierons l'état de phosphorylation de la Ser345 sur la p47phox, les activités de Pin1 et de la PLD ainsi que la production de FRO dans les PN de liquides synoviaux de patients atteints de PR. L'effet d'un peptide compétiteur du site phosphoSer345 ainsi que l'inhibiteur de Pin1 et les antagonistes de la PLD seront étudiés dans un modèle de polyarthrite chez le rat. Ce projet bénéficie d'outils développés dans l'équipe tel l'anticorps antiphosphoSer345 et le peptide compétiteur de ce site qui ont été brevetés. Enfin, nous montrerons que l'IL-1b induit la synthèse d'une adipokine, la Visfatine qui pourrait induire une hyperactivation de la NADPH oxydase dans la PR. La compréhension des mécanismes régulant l'hyperproduction des FRO par les PN traités par des cytokines proinflammatoires est nécessaire au développement de nouveaux agents thérapeutiques en complément de ceux déjà utilisées dans la PR.//Nous espérons identifier les mécanismes moléculaires intervenant dans l'hyperactivation de la NADPH oxydase des PN induite par des cytokines proinflammatoires. Nous pensons montrer une interaction entre Pin1 et un site de phosphorylation que nous avons identifié sur la p47phox ainsi que l'implication de cette interaction dans l'activation de la NADPH oxydase. Un couplage entre les MAPKs et la PLD pourrait participer à l'hyperactivation de la NADPH oxydase. Ces hypothèses seraient validées en suivant l'évolution de la phosphoSer345, des activités Pin1 et PLD chez des patients atteints de PR. Les antagonistes développés au cours de ce projet seront testés dans un modèle de polyarthrite chez le rat. Enfin, nous espérons montrer un nouvel effet de la Visfatine produite par les chondrocytes sous l’effet de l'IL-1b. L’identification de ces mécanismes moléculaires pourrait identifier de nouvelles cibles thérapeutiques complémentaires de celles existant aujourd'hui dans le traitement de la PR.