Vectorisation de Méganucleases pour l'ingénierie des génomes – DEMENAGE

Les partenaires de DEMENAGE disposent d'une expertise dans le design et l'utilisation d'endonucleases séquence spécifiques, les méganucléases, pour le ciblage génique dans des cellules de mammifère. Les méganucléases permettent d'inactiver des gènes ou d'insérer des séquences de façon ciblée dans le génome, pour des applications dans les biotechnologies, ou à des fins thérapeutiques.
DEMENAGE vise le transfert de gènes à des fins thérapeutiques, et développera des méganucléases et des vecteurs spécialisés pour la vectorisation de ces méganucléases, pour permettre l'intégration ciblée de gènes thérapeutiques. Les partenaires de DEMENAGE développeront une approche dans laquelle les séquences thérapeutiques seront systématiquement ciblées vers un locus dédié, appelée « safe harbor », dans le génome humain. Ce locus safe harbor sera choisi dans le but de permettre une expression stable du transgene en limitant les risques liés au site d’insertion dans le génome.
En parallèle, les questions de l'efficacité et de la toxicité seront systématiquement étudiées. Des méganucléases artificielles correspondant aux designs les plus avancés seront incorporées dans des vecteurs viraux dérivés de Lentivirus ou de Parvovirus (AAV). L'objectif principal du projet est de délivrer les nucléases de façon transitoire, de préférence sous la forme de protéines, dans les cellules cibles. En conséquence, les nucléases agiront de façon transitoire uniquement, sans la toxicité potentiellement associée à une exposition persistante du génome à ces nucléases. Les vecteurs dérivés de Lentivirus seront testés ex vivo sur des cellules souches hématopoïétiques et sur des kératinocytes, tandis que les vecteurs AAV seront utilisés pour atteindre le foie in toto. DEMENAGE produira donc des agents suffisamment surs et efficaces pour vectoriser les méganucléases dans les applications de thérapie génique, et à fortiori dans nombre d'autres applications.