Nouvelles fonctions vasculaires de la thrombospondine-1 – VASC-TSP1

Cette proposition a été concue pour obtenir un nouveau point de vue sur la Thrombospondine-1 (TSP1), au dela de son role anti-angiogénique. La TSP1 est relarguée par les plaquettes et l'endothélium activés durant la thrombose et l'inflammation et représente le principal inhibiteur endogène de l'angiogenèse. Nous avons mesuré ses effets sur des cellules progénitrices endothéliales. A notre suprise, nous avons trouvé que la TSP1 ne stimule pas l'apoptose comme dans les cellules endothéliales matures, mais accélére l'adhésion et l'étalement des EPC. De plus, le recrutement d'EPC circulantes lors de la thrombose est totalement bloqué chez les souris déficientes en TSP1. Enfin, pré-traiter des EPC de souris avec des peptides agonistes de CD47 stimule leur activité angiogenique dans l'ischémie de membre. Notre hypothèse est que la TSP1 constitue un signal positif nécessaire au recrutement des EPC circulantes et qui favorise la vasculogenèse. Nous voulons étudier cette fonction de la TSP1.//Pour réveler le rôle inattendu de la TSP1 dans la vasulogenèse, nous choisissons 5 objectifs à atteindre en 3 ans. Nous étudierons d'abord les fonctions des EPC in vitro et dans des vaisseaux isolés, puis caractériserons le recrutement des EPC lors du depôt transient et chronique de TSP1 in vivo. Nous démontrerons les bénéfices thérapeutiques des signaux TSP1-CD47 dans la néovascularization ischémique, et évaluerons la signalisation TSP1-CD47 dans les EPC de patients avec maladie cardiovasculaire. But I; Nous étudierons les signaux TSP1-CD47 dans l'adhésion, l'étalement, la survie et la différenciation des EPC murines et humaines. Nous caractériserons le phénotype de nos cellules après traitement avec la TSP1 ou des agonistes du CD47. But II; Nous mettrons en évidence le rôle de la TSP1 dans le recrutement d'EPC circulantes dans des modèles murins de thrombose intravasculaire et lors de modifications chroniques de debit sanguin. But III; Nous testerons l'efficacité de nouvelles approaches de thérapie cellulaire et les benefices des signaux TSP1-CD47 dans un modèle murin de néovascularisation ischémique. But IV; Nous déterminerons l'impact des signaux TSP1-CD47 sur la production de NO par les EPC et la vasodilatiation qu'elles entrainent. But V; Nous proposons un programme de recherche clinique pour définir les conséquences physiopathologiques des signaux TSP1-CD47 sur les EPC et les cellules inflammatoires circulantes issues de patients athéroscléreux. Le travail concerté de nos 3 laboratoires avec des experts internationaux nous fourni déjà l'accés à de la TSP1 purifiée et recombinante, à des agonistes synthétiques du CD47 et à des ELISA pour TSP1. Nous cultivons des EPC circulantes primaires humaines et isolons des cellules de moelle de souris en routine. Nous avons établi des colonies de souris TSP1-/- et CD47-/-. Nous voulons maintenant comprendre les implications physiopathologiques de la TSP1 dans le recrutement et l'activité vasculogénique des EPC. //Ces études ne permettront pas seulement d'étendre notre compréhension des mécanismes de la vasculogenèse dans les tissues adultes, mais vont aussi modifier notre point de vue sur la modulation de la composition cellulaire et de la fonction des vaisseaux sanguins par la TSP1. Nos modèles animaux et nos approches de biologie cellulaire ont déjà permis de déposer une demande de brevet, démontrant la faisabilité du projet et l'apport de notre collaboration. Les résultats démontrent que les signaux TSP1-CD47 favorisent la greffe d'EPC et la néovascularisation ischémique. Nous étudierons particulièrement la cinétique et les concentrations de TSP1 dans nos modèles murins, et expliquerons le décalage entre nos observations et la litérature. Les implications pourraient être particulièrement attrayantes pour la transplantation autologue d'EPC qui sont dysfonctionnelles chez les patients atteints de maladies cardiovasculaires, ce qui limite aujourd'hui les applications de thérapie cellulaire.