Le Role de BAD-LAMP dans le developpement et le fonctionnement cortical – BAD-Lamp Layers

Les neurones du cortex qui ont des propriétés fonctionnelles, une morphologie et une connectivité semblables sont groupés dans des couches corticale bien définies. Bien que des informations considérables soient disponibles sur la différentiation de ces couches , peu de choses sont connues sur les mécanismes qui confèrent leurs propriétés particulières aux différentes couches. Nous avons identifié une nouvelle protéine membranaire de la famille des LAMP qui est trouvée dans le cerveau et les cellules dendritiques (BAD-LAMP). BAD-LAMP est exprimée spécifiquement dans certains neurones des couches II, III et V du neocortex. Son apparition dans le cerveau postnatal de souris est corrélée avec la différentiation terminale et la synaptogénèse. BAD-LAMP est présent dans des compartiments endocytiques spécialisés, ce qui suggère un rôle dans l'organisation de domaines membranaires. BAD-LAMP pourrait être une molécule déterminante pour la maturation des neurones corticaux. //Dans ce projet, nous étudierons le trafic et la fonction de BAD-LAMP en utilisant des approches de biologie cellulaire et de génétique de la souris. Le projet est basé sur l'expertise complémentaire des deux groupes participants et peut être subdivisé en trois parties principales: 1. Nous produirons des anticorps momoclonaux et étudierons le transport de BAD-LAMP dans des neurones et des cellules transfectés. En particulier, nous identifierons le compartiment endocytique spécialisé dans lequel BAD-LAMP est exprimé dans les neurones et analyserons le rôle de ce compartiment dans l'organisation des microdomaines lipidiques à la surface cellulaire. Nous utiliserons les techniques de RNAi dans des neurones primaires pour étudier la fonction de BAD-LAMP. 2. Nous caractériserons les partenaires moléculaires de BAD-LAMP. Nous utiliserons un crible double-hybrides avec comme cible la partie cytoplasmique de BAD-LAMP ainsi que celle de plusieurs mutants générés par nos soins. En outre, nous emploierons des techniques de co-immunoprécipitation sur des extraits corticaux pour compléter ces études. 3. Nous appliquerons des techniques de génétique de la souris pour élucider la fonction de BAD-LAMP dans le cerveau par invalidation génique. Nous emploierons ainsi des vecteurs lentiviraux et le RNAi pour interférer avec l'expression de BAD-LAMP dans le cortex postnatal. Des souris déficientes de BAD-LAMP seront produites pour étudier les conséquences de la perte de cette molécule sur la morphologie et la fonction du cerveau et pour produire des outils pour des études biologiques des couches corticales.//Le projet présenté ici est destiné à définir la fonction de BAD-LAMP, un nouveau membre de la famille de LAMP (lysosomal associated membrane proteins). L'étude se concentrera sur la biologie cellulaire et la fonction in vivo de cette protéine. Nous comptons élucider le trafic intracellulaire de BAD-LAMP et définir la nature du compartiment cellulaire spécialisé qu'elle définit. Nous visons à identifier les partenaires moléculaires de BAD-LAMP et identifier ainsi les signaux potentiellement générés par cette protéine. In vivo, nous emploierons la génétique de souris pour collecter des informations sur le rôle spécifique de BAD-LAMP dans la couche II, III et V des neurones corticaux. En raison de son apparition tardive, nous nous attendons à ce que BAD-LAMP ait des fonctions dans la differentiation terminale come, par exemple, la synaptogénèse ou la fonction synaptique.