Anticorps recombinant anti-GPVI : Ingénierie et Préclinique – AGIP

Les maladies cardiovasculaires sont la première cause de mortalité dans le monde,~17 millions de décès par an dont la majorité consécutifs à une thrombose coronaire ou cérébrale. Malgré les progrès de l’angioplastie, des stents et des médications antithrombotiques. les récidives et décès post accident coronaire restent élevés, et le traitement des AVC très limité. L’activation des plaquettes est critique dans l'athérothrombose mais les molécules antiplaquettaires actuelles (marché de 7.8 milliards USD en 2005) sont encore insuffisantes ou présentent des effets secondaires. La phase précoce d'adhésion et d'activation des plaquettes par le collagène est une cible potentielle majeure pour développer de nouveaux antithrombotiques. Notre objectif est de cibler la GPVI récepteur spécifiquement plaquettaire du collagène. Cette stratégie complémentaire par rapport aux molécules existantes permet un risque hémorragique réduit et une prévention des récidives de thrombose et de sténose vasculaire. La GPVI est une cible d'intérêt majeur pour développer un médicament prévenant l'activation des plaquettes à un stade précoce, à risque hémorragique réduit et complémentaire des molécules existantes. Notre but est de générer une molécule bloquant la liaison de GPVI au collagène tout en préservant une hémostase satisfaisante, sans risque d'activation intrinsèque des plaquettes et qui n'induise pas de thrombopénie. Nous avons identifié un anticorps monoclonal anti-GPVI humaine dont le fragment Fab inhibe toutes les fonctions de la GPVI in vitro et est antithrombotique ex vivo chez le singe Notre stratégie repose sur la production par ingénierie moléculaire de fragments recombinants d'anticorps anti-GPVI et l'élaboration d'un modèle préclinique d'étude de leur effet antithrombotique chez la souris. Un fragment monovalent simple chaîne (scFv) murin anti-GPVI a été obtenu. Il est inhibiteur de l'interaction GPVI-collagène et de l'activation des plaquettes in vitro. L'humanisation de ce scFv par greffe de domaines hypervariables CDR est en cours. Deux scFv humanisés ont été construits. La construction de scFv chimériques souris/humanisé indique un facteur limitant à la production au niveau du domaine variable de la chaîne légère (VL). Les modifications du VL sont en cours. Le scFv humanisé ainsi obtenu sera testé pour son affinité pour la GPVI et pour son efficacité inhibitrice in vitro. Puis la production d'un Fab humanisé sera réalisée. Une souris humanisée pour GPVI par knock-in sera crée afin de tester l'efficacité des antagonistes de GPVI dans différents modèles expérimentaux de thrombose in vivo et d’effectuer les études pré cliniques (toxicologie, pharmacocinétique, effet sur l'hémostase). En effet, la spécificité de l'anticorps est restreinte à l'homme et aux primates non humains ce qui limite la possibilité d'études in vivo, et nécessite la production de quantités très importantes de fragments hautement purifiés et de qualité suivie. Le but final est d’obtenir une molécule antithrombotique ciblant spécifiquement l’étape précoce de l’activation des plaquettes. Le Fab que nous développons sera à administration parentérale, pour une indication ciblée de nature interventionelle, de durée limitée en phase aiguë : (i) des syndromes coronariens aigus traités médicalement; (ii) du traitement interventionnel des thromboses par angioplastie et stent. Administrée avant et pendant angioplastie, la molécule devrait être particulièrement efficace dans la prévention des thromboses et sténose sur stent; (iii) de l’ischémie cérébrale aiguë récente et/ou transitoire. Nous ciblons donc au moins le marché des inhibiteurs de GPIIbIIIa, cible moins spécifique que GPVI -, dont le Reopro ‘ un autre Fab, d’usage limité par des hémorragies secondaires. Ce marché, restreint par le manque de spécificité, approchait 600 M¿ en 2005. La souris humanisée pour GP